冷冻超薄切片技术（电镜制样）
冷冻超薄切片技术是在光学显微冷冻切片和电镜超薄切片的基础上发展起来的。由于常规超薄切片技术中应用化学固定、有机溶剂脱水、树脂包埋等一系列处理，均可使生物样品受到物理和化学性损伤，引起组织和细胞内蛋白质分子变性，大部分可溶性成分及某些生物大分子物质被抽提或发生移位。为了弥补这些缺陷，人们创造了冷冻超薄切片技术。70年代后，出现商品冷冻超薄切片装置，使该技术有了更大发展。目前，此技术可在分子水平上研究新鲜生物样品的超微结构、各种生物大分子和某些元素在细胞内的分布状态，并在细胞化学、免疫电镜、X射线微区分析及可溶性物质放射自显影研究等方面发挥巨大作用。超薄切片技术主要操作程序：
1.样品预处理。包括两种方法:一种是样品直接冷冻固定，该法有利于保存生物样品中可溶性物质及生物大分子的活性、天然构型和保持元素的分布状态，主要用于生物样品内可溶性物质的放射自显影和X射线微区分析；另一种是对样品先采用戊二醛固定、冷冻保护剂浸泡等预处理，此法适用于细胞化学、免疫电镜等超微形态学研究。
2.快速冷冻固定。冷冻超薄切片质量的好坏直接决定于快速冷冻效果。常用的快速冷冻方式有二：一是液氮直接冷冻；二是金属接触冷冻。后一种方法较好，即将铜块先置于液氮中，待温度平衡后，将样品与铜块接触5～10秒钟，以达到快速传导降温的目的，然后再将样品置于液氮中待用。
3.切片。此步就用到关键器具——冷冻超薄切片机。该机是在固有型超薄切片机基础上附加低温操作装置组成的。
4.染色。冷冻超薄切片可采用正染色或负染色。
以上是最近网上查的关于冷冻超薄切片的一些基础知识，都是很浅显并且也是比较老的东西。
超薄切片技术是当前生物医学电镜技术中的关键技术。目前由于高分子材料形态结构学的发展，特别是高分子材料多具有性质柔软，有一定弹性和勒性、结构致密等特点，室温下不易切片或不能切片。因此，在高分子材料结构和分析方面，开展冷冻超薄切片工作是十分必要的。
下面一篇文献也是比较早期的，讲述高分子材料的冷冻超薄切片技术，介绍了作者在高分子材料领域冷冻超薄切片技术方面的一些经验。（没找到新的···）
如有经常接触这方面工作的同学可以相互探讨。
实验室有离子减薄机，那里制出的应该算超薄切片吧？ 李团伟 发表于 2014-11-21 19:54
实验室有离子减薄机，那里制出的应该算超薄切片吧？
看看最终厚度有多少···
超薄切片机切出来最终弄出来厚度是50~70nm，0.1um以内算超薄。
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