反相液相色谱已成为最普遍的液相分离模式，在反相色谱中是非极性固定相和极性流动相。分析物通过自身的非极性功能团和固定相非极性基团相互作用而保留。分析物依次从高极性到低极性的顺序洗脱，反相色谱主要用来分离高中等极性的化合物。反相色谱柱及其保留能力为：C18>C8>C4>C1。

反相液相色谱的固定相选择有很多种，即使特定的固定相（如C18）其选择的种类也非常多。在反相液相色谱的固定相选择时，要考虑化学键合相、活性硅胶表面的处理、硅胶表面的可接触性等，这些因素都会影响到液相色谱最后的分离效果以及方法开发的优化。

分离中等极性和极性较强的化合物可选择极性键合相。氨基键合相具有较强的氢键结合能力，对某些多官能团化合物如甾体、强心甙等有较好的分离能力；氨基键合相上的氨基能与糖类分子中的羟基产生选择性相互作用，故被广泛用于糖类的分析，但它不能用于分离羰基化合物，如甾酮、还原糖等，因为它们之间会发生反应生成Schiff 碱。分离极性较弱和非极性的化合物可选择非极性键合相。非极性键合相也可用于分离离子型或可离子化的化合物。ODS(octadecyl silane)是应用最为广泛的非极性键合相，它对各种类型的化合物都有很强的适应能力。短链烷基键合相能用于极性化合物的分离，而苯基键合相适用于分离芳香化合物。

色散作用在许多反相分离中都发挥着重要的作用，特别是在未改性的烷基配体（C18、C8、C4）中，其保留能力与被分析物的疏水性成正比。固定相或被分析物在含有芳香基团或不饱和基团时，电荷转移（或π-π）起重要的作用。当被分析物为极性化合物时，含有“氰基”的固定相会增强对极性化合物的保留，这是因为固定相硅胶表面有离子化的硅醇基与被分析物之间存在静电作用力。
表一总结了一些当前常用固定相的分类及其相关应用领域。

表一：一些主要固定相分类及其主要应用

固定相	配体	应用
C18（烷基）	-C18H37	大多数烷基固定相可保留药物，类固醇，脂肪酸，邻苯二甲酸酯，环境污染物
极性嵌入C18	-C16H33NO	对氨基甲酸酯及其类似物质等极性强的被分析物保留更强，能够达到更好的分离效果。
氰基（氰丙基）	-(CH2)3CN	对于极性化合物及有多重不同化学成分的溶质有独特的选择性
苯基（二苯基）	-C6H5(-C12H9)	芳香族和中等极性化合物
五氟苯基（PFP）	-C6F5	对于卤化物、极性和异构体物质有较强的选择性
氨基（氨丙基）	-(CH2)3NH2	可用作pH控制的弱阴离子交换剂，用以增强静电保留

反相液相色谱已成为最普遍的液相分离模式，在反相色谱中是非极性固定相和极性流动相。分析物通过自身的非极性功能团和固定相非极性基团相互作用而保留。分析物依次从高极性到低极性的顺序洗脱，反相色谱主要用来分离高中等极性的化合物。反相色谱柱及其保留能力为：C18>C8>C4>C1。

反相液相色谱的固定相选择有很多种，即使特定的固定相（如C18）其选择的种类也非常多。在反相液相色谱的固定相选择时，要考虑化学键合相、活性硅胶表面的处理、硅胶表面的可接触性等，这些因素都会影响到液相色谱最后的分离效果以及方法开发的优化。

分离中等极性和极性较强的化合物可选择极性键合相。氨基键合相具有较强的氢键结合能力，对某些多官能团化合物如甾体、强心甙等有较好的分离能力；氨基键合相上的氨基能与糖类分子中的羟基产生选择性相互作用，故被广泛用于糖类的分析，但它不能用于分离羰基化合物，如甾酮、还原糖等，因为它们之间会发生反应生成Schiff 碱。分离极性较弱和非极性的化合物可选择非极性键合相。非极性键合相也可用于分离离子型或可离子化的化合物。ODS(octadecyl silane)是应用最为广泛的非极性键合相，它对各种类型的化合物都有很强的适应能力。短链烷基键合相能用于极性化合物的分离，而苯基键合相适用于分离芳香化合物。

色散作用在许多反相分离中都发挥着重要的作用，特别是在未改性的烷基配体（C18、C8、C4）中，其保留能力与被分析物的疏水性成正比。固定相或被分析物在含有芳香基团或不饱和基团时，电荷转移（或π-π）起重要的作用。当被分析物为极性化合物时，含有“氰基”的固定相会增强对极性化合物的保留，这是因为固定相硅胶表面有离子化的硅醇基与被分析物之间存在静电作用力。
表一总结了一些当前常用固定相的分类及其相关应用领域。

表一：一些主要固定相分类及其主要应用

固定相	配体	应用
C18（烷基）	-C18H37	大多数烷基固定相可保留药物，类固醇，脂肪酸，邻苯二甲酸酯，环境污染物
极性嵌入C18	-C16H33NO	对氨基甲酸酯及其类似物质等极性强的被分析物保留更强，能够达到更好的分离效果。
氰基（氰丙基）	-(CH2)3CN	对于极性化合物及有多重不同化学成分的溶质有独特的选择性
苯基（二苯基）	-C6H5(-C12H9)	芳香族和中等极性化合物
五氟苯基（PFP）	-C6F5	对于卤化物、极性和异构体物质有较强的选择性
氨基（氨丙基）	-(CH2)3NH2	可用作pH控制的弱阴离子交换剂，用以增强静电保留